مشخصات پژوهش

عنوان	شناسایی باکتریهای همزیست غالب دستگاه گوارش بید غلات (Sitotorga cerealella)
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	باکتری های همزیست، بید غلات، Enterobacter hormaechei ، Enterococcus mundtii
چکیده	چکیده: بید غلات یکی از آفات مهم انباری است خسارت این آفت هم از نظر کیفیت وهم از لحاظ کمی دارای اهمیت زیاد است زیرا لاروها ضمن تغذیه فضولات خود را درون دانه ها انباشته کرده و همراه با پوسته های لاروی و تارهای تنیده شده کیفیت دانه را به شدت دگرگون می کند و در نتیجه ارزش اقتصادی و کیفیت دانه پایین خواهد آمد. با توجه به اینکه حشرات بزرگترین گروه بی مهره گان هستند مطالعه ی همزیست در حشرات مختلف برای شناخت بهتر چگونگی تکامل و آشنایی با رویدادهای اکولوژیکی دارای اهمیت است. در این پژوهش، باکتری های همزیست دستگاه گوارش بید غلات شناسایی شد.برای پرورش بید غلات از جو اصلاح شده با درصد پروتئین بالا استفاده شد. ظرف حاوی جو بعد از آلوده سازی در اطاقک رشد در شرایط دمایی 1±24 درجه سلسیوس ورطوبت نسبی 5 ± 65 درصـد نگهـداری شـدند. جهت جدا نمودن باکتری های دستگاه گوارش بید غلات از بین جمعیت پرورش داده شده 10 لارو (سن 4 ) سالم انتخاب شد. دستگاه گوارش لاروها پس از ضد عفونی در اتانول 70 درصد، هیپوکلریت سدیم 5درصد و آب مقطر خارج شد سپس جهت همگن نمودن دستگاه گوارش از یک میلی لیتر بافر فسفات 0.1مولار با 7pH= استفاده شد. محتویات همگن و رقیق شده در محیط کشت نوترینت آگار کشت داده شد سپس باکتری کشت داده شده از محیط کشت جمع آوری شد و در محیط کشت مایع که شامل 10 گرم پپتون ، 5 گرم عصاره مخمر ، 5 گرم کلرید سدیم ، 0.1 گرم کلرید پتاسیم و یک لیتر آب مقطر کشت داده شد. برای انجام واکنش های زنجیره ای پلیمراز از5 میکرو لیتر Master Mix (که شامل آنزیم Taq DNA Polymerase ، dNTPS، Mgcl2 و آنزیمهای پلیمراز می باشد) ، 2 میکرولیتر DNA استخراج شده ، 1.5 میکرولیتر پرایمر RP2 و 1.5 میکرو لیتر پرایمر FD1 و 15 میکرولیتر Distilled Water که حجم کلی این مواد باید به 25 میکرو لیتر برسد. فرآیند PCR با استفاده از پرایمر های عمومی FD1 و RP2 و توالی ژن 16srRNA در دستگاه ترموسایکلرانجام شد. توالی یابی محصول PCR تهیه شده با همکاری شرکت Bioneer کره جنوبی انجام شد و نتایج در سایت NCBI مورد بررسی قرار گرفت. ویژگی های فنوتیپی باکتری های جدا شده با روش های استاندارد باکتری شناسی مشخص شد. بعد از بررسی تمام کلونی های تهیه شده و مقایسه نتایج بدست آمده بیشترین فراوانی از نظر تعداد کلنی مختص به باکتری mundtii Enterococcus بود و باکتری Ent
پژوهشگران	مجید کزازی (استاد راهنما)، راحله مرادی (دانشجو)، غلام خداکرمیان (استاد مشاور)