|
عنوان
|
همسانه سازی، انتقال و بیان ژن زیر واحد B اوره آز هلیکوباکتر پیلوری در گیاه فلفل دلمه
|
|
نوع پژوهش
|
پایان نامه
|
|
کلیدواژه‌ها
|
هلیکوباکتر پیلوری، اوره آز، واکسن، فلفل دلمه ای، اسپورزائی، گامت زائی
|
|
چکیده
|
چکیده: هلیکوباکتر پیلوری یکی از عفونت های باکتریائی مزمن بسیار رایج می باشد که حداقل نصف مردم جهان را تحت تاثیر قرار داده است. تقریبا در 10 درصد از افراد آلوده، بیماری زخم پپتیکی و در 1 درصد از این افراد سرطان معده را موجب خواهد شد. اگرچه شیوع هلیکوباکتر پیلوری در کشور های توسعه یافته کاهش پیدا کرده، نتایج اخیر نشان می دهند که واکسیناسیون اطفال به طور موثری از شیوع این عفونت پیشگیری خواهد نمود. آنزیم اوره آز برای کلونیزه شدن باکتری در محیط اسیدی معده نقشی حیاتی بر عهده دارد. علاوه بر این، اوره آز (شامل پروتئین های زیر واحد UreA و UreB) یکی از مهم ترین آنتی ژن های شناسائی شونده توسط سیستم ایمنی انسان بوده و به نظر می رسد که UreB مصونیت زا تر از UreA می باشد. سیستم تحویل آنتی ژن می-تواند کیفیت و کمیت پاسخ ایمنی را تحت تاثیر قرار دهد. ثابت شده است که پروتئین های تولیدی در گیاهان تراریخته قادرند پاسخ های ایمنی محافظت کننده را بر علیه پاتوژن های مهم برانگیزند. بر این اساس، بیان ureB نوترکیب در گیاهان فلفل دلمه به منظور ایمنی زائی بر علیه عفونت هلیکوباکتر پیلوری یک موضوع جذاب است. در این مطالعه، هلیکوباکتر پیلوری سویه NCTC11637 بر روی محیط کشت بروسلا آگار غنی شده با خون گوسفندی کشت و در دمای oC37 و شرایط میکروآئروفیل نگهداری شدند. DNA ژنومی باکتری به روش لیز قلیائی و از طریق جوشاندن استخراج گردید. به کمک نرم افزار Vectore NTI و با استفاده از توالی ژنی دریافتی از بانک اطلاعات ژنی (به شماره دسترسی AY295085.1)، یک جفت آغازگر اختصاصی برای ژن ureB طراحی شد. به کمک فرآیند PCR و با استفاده از آغازگر رو به جلو محتوی جایگاه برشی BamHI و آغازگر معکوس محتوی جایگاه برشی SacI، توالی کد کننده ژن ureB به طول bp1730 از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری جداسازی شد. محصولات PCR بر روی ژل آگارز 8/0 درصد الکتروفورز گردید. برای خالص سازی ژن از دیگر عوامل PCR موجود، از کیت خالص سازی ویژه (ویوانتیس، مالزی) استفاده شد. صحت توالی ژن ureB از طریق آنالیز توالی DNA تائید گردید. مطابق با دستورالعمل شرکت سازنده، محصول PCR در ناقل pTG19-T الحاق یافت. بعد از مستعد کردن سلول ها، پلاسمید نوترکیب به میزبان شایسته اش، یعنی باکتری ای.کلای سویه DH5α منتقل شده و باکتری ها بر روی محیط LB آگار محتوی آنتی بیوتیک آمپی سیلین،
|
|
پژوهشگران
|
عبدالکریم چهرگانی راد (استاد راهنما)، حسن رمضانی (دانشجو)، رویا کرمیان (استاد مشاور)، فریبا محسن زاده (استاد مشاور)
|