مشخصات پژوهش

عنوان	عنوان: اثر بازدارنده های پروتئازی برخی ارقام لوبیا و سویا بر فعالیت پروتئازی گوارشی سرین و سیستئین سوسک کلرادو سیب زمینی Leptinotarsa decemlineata(Coleoptera: Chrysomelidea)
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	تریپسین، کیموتریپسین، کاتپسینB، مهارکننده پروتئازی، KM و Vmax
چکیده	در ایران سیب زمینی از جایگاه ویژه ای برخوردار است و از نظر نیاز مردم به آن بعد از غلات در درجه دوم اهمیت قرار دارد. سوسک کلرادو سیب زمینی Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidea) در سال های اخیر آفت عمده مزارع سیب زمینی بوده است. متاسفانه استفاده منحصر به فرد از سموم برای کنترل مقاومت آفت را در پی داشته است. امروزه مهار آنزیم های گوارشی حشرات زیان آور توسط مهارکننده های پروتئازی طبیعی در ارقام مقاوم یا گیاهان تراریخته یکی از کاربردی ترین رهیافت ها در برنامه مدیریت تلفیقی آفت می باشد. نتایج تحقیقات پیشین نشان می دهد که تأثیر پروتئین های دفاعی گیاهان غیر میزبان بیشتر از گیاهان میزبان می باشد؛ از این رو مطالعه حاضر می تواند راه کار مناسبی برای کنترل آفت مورد نظر باشد. در این تحقیق بررسی اثر مهارکننده های پروتئازی از رقم های اختر و ناز و درخشان از لوبیا و رقم هال الیت و ال-17 از سویا روی فعالیت پروتئازی سرین و مورد مطالعه قرار گرفت. پروتئین های بازدارنده استخراج شده از ارقام ال-17 و اختر با 79/73% و 12/71% برای حشرات کامل و 54/43% و 72/20% برای لاروها به ترتیب دارای بیشترین مهارکنندگی فعالیت پروتئولتیک کل بودند. پروتئین های مهارکننده دو رقم مذکور توسط کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با استفاده از سفادکس 75 Gخالص شدند. بیشترین میزان مهارکنندگی فرکشن های انتخاب شده از رقم ال-17 و اختر روی فعالیت پروتئولتیک کل، تریپسین، کیموتریپسین و کاتپسینB برای رقم ال-17 به ترتیب مربوط به فرکشن های 46-34، 130-122، 142-131، 130-122 و در رقم اختر برای تمامی آنزیم ها مربوط به فرکشن 25-21 بود. زایموگرام حاصل از فعالیت تریپسین و کیموتریپسین و کاتپسینB برای حشرات کامل به صورت یک باند واضح برای تریپسین و کیموتریپسین و یک باند قطور برای کاتپسینB در عدم حضور مهارکننده ال-17 بود؛ در حالی که در حضور مهارکننده هیچ باندی برای تریپسین و کیموتریپسین مشاهده نشد و برای کاتپسینB یک باند ضعیف قابل روئیت بود. در نهایت سه باند برای فعالیت پروتئین های خالص سازی شده از ال-17 با استفاده از Non- denaturing SDS-PAGE تشخیص داده شد. با محاسبه KM و Vmax برای تریپسین و کیموتریپسین در حضور و عدم حضور مهارکننده به دلیل ثابت باقی ماندن مقدار Vmax و افزایش مقدار KM مهار از نوع رقابتی معرفی شد.
پژوهشگران	مجید کزازی (استاد راهنما)، نوشین گنجی (دانشجو)