پژمان محمودی کوهی

هدف از این تحقیق شناسایی چندشکلی های موجود در ژن GPR54 در گوسفند نژاد مهربان با کمک روش های چندشکلی تک رشته ای فضایی (SSCP) و توالی یابی مستقیم و بررسی تاثیر ارتباط آن با رکوردهای چندقلوزایی بود. ژن GPR54 به عنوان یکی از ژن های موثر بر باروری شناخته شده است که در افزایش نرخ تخمک گذاری و چندقلوزایی موثر است. از تعداد 100 راس گوسفند نژاد مهربان به طور تصادفی نمونه خون تهیه و استخراج DNA به روش کیت از خون کامل انجام شد. در واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی در مرحله اول یک قطعه 923 جفت بازی منطقه تنظیمی ژن، یک قطعه 850جفت بازی اگزون و اینترون 1 و قطعه 925 جفت بازی اگزون و اینترون 2 و همچنین اگزون 3 ژن GPR54 تکثیر شدند که در ادامه از هر نژاد بصورت تصادفی دو نمونه مستقیما توالی یابی شدند. نتایج وجود 4 جهش تک نوکلئوتیدی در منطقه تنظیمی ژن و یک جهش تک نوکلئوتیدی در اینترون 1 را نشان داد. در مرحله دوم تحقیق برای بررسی دقیق تر جهش ها در منطقه تنظیمی ژن و همچنین بررسی احتمالی وجود جهش در مناطق دیگر ژن با استفاده از پرایمرهای اختصاصی قطعه 295 جفت بازی بخشی از منطقه تنظیمی ژن، قطعه 321 جفت بازی اگزون 4 و همچنین قطعه 257 جفت بازی اگزون 5 ژن GPR54 تکثیر شدند. در قطعه منطقه تنظیمی ژن چهار چند شکلی تک نوکلئوتیدی T→G، T→C، C→A و A→C در جایگاه های به ترتیب 74، 134، 153 و 249 جفت باز در دوالگوی متفاوت ازSSCP از ژن، یک چند شکلی A→C در جایگاه نوکلئوتیدی 106 جفت باز در اگزون 4 با دو الگوی متفاوت SSCP از ژن شناسایی شد که منجر به تغییر یک اسید آمینه گردید. همچنین سه چند شکلی در سه الگوی متفاوت SSCP در اگزون 5 ژنGPR54، تک نوکلئوتیدی G→A و C→A به ترتیب در جایگاه های 160 و 175 جفت باز و یک جهش تک نوکلئوتیدی جایگزینی A با G در جایگاه 160 جفت باز شناسایی شد که منجر به تغییر اسیدآمینه نگردید. بررسی ارتباط بین ژنوتیپ ها با صفات تولیدمثلی شامل تعداد بره در هر زایش (LS)، میانگین وزن بره های متولد شده در هر زایش (ABWL)، میانگین مجموع وزن بره های متولد شده (TBWL)، نشان داد که چندشکلی مربوط به منطقه تنظیمی ژن، ارتباط معنی داری با صفات تولیدمثلی بررسی شده، نداشتند. چندشکلی های مشاهده شده در اگزون 4 و اگزون 5 ژن GPR54 رابطه ی معنی دار با صفات تولیدمثلی مورد مطالعه داشتند (05/0