مریم ملک محمدی

در بررسی های قبلی (ملک محمدی و همکاران 2010، 2011) با استفاده از آزمون های زیست سنجی و سینرژیسم و نیز تلفیق آنها با روش های بیوشیمیایی و تشخیص مولکولی سعی شد تا اساس مقاومت به فوزالون به عنوان یک حشره کش فسفره در جمعیت های مقاوم سوسک کلرادوی سیب زمینی Leptinotarsa dcemlineata در استان همدان روشن گردد. در طرح حاضر سعی شد تا با بهره گیری از روش های مولکولی RT-PCR وT-ARMS-PCR، ضمن پی بردن به نقشه کامل ژنی آنزیم استیل کولین استراز در جمعیت های مزرعه ای مقاوم و شناسایی جهش یا جهش های احتمالی، به طور اختصاصی امکان وجود و فراوانی احتمالی جهش های مقاومتی K30R و I392T نیز بررسی گردد. نتایج نشان دادند که همه ی افراد مورد بررسی از کلنی حساس برای آلل حساسِ ژن ace ، خالص بودند. حال آنکه به ترتیب 6/21% درصد و تنها 66/1% درصد سوسک های مقاوم برای جهش R30K و I392T در آلل مقاوم ace، خالص ناخالص بودند. در مجموع با توجه به درصد خلوص پایین بدست آمده برای جایگزینی های فوق در بین جمعیت های مزرعه ای و نیز پایین بودن فراوانی جهش های مورد بررسی، به نظر رسید که عامل و یا عوامل دیگری نیز باید در مقاومت بالای جمعیت ها ی مزرعه ای به فوزالون، دخیل باشند. استخراج RNA و ساخت cDNA نیز با عنایت به همین موضوع، انجام گرفت. صرف نظر از موارد مربوط به حذف ها و جایگیری ها ، مقایسه توالی DNA ژنومی سویه ی حساس و جمعیت های مزرعه ای نشان داد که آنها از نظر موقعیت 99 نوکلئوتید با هم تفاوت دارند، اما تنها 64 مورد از این تفاوت ها به جایگیری های غیر همنام آمینواسیدی (جهش هایV11G، A15V/D، V17I/E، C18S، P23A، S24R/G، D25G، E26K، T28P، T29P، R30K، T39R، P41S، P80K، P86L، P89R، W90R، G92L، L94V، A96D، Q99H، P100L، N101I، E109D/K، F114P، R144L، D215Y، Q278A، S291G، E313Y، P316Q، M320I، C322G، R324K/I، K329R، S332W، Q334S/H، Q335P، N337Y، G341V، I342N و F345Y) و به نوعی به کاهش احتمالی حساسیت آنزیم به حشره کش ها منجر شده است. سایر جایگزینی های توالی نوکلئوتیدی مشاهده شده در سوسک های مقاوم منجر به تغییرات همنام توالی آمینواسیدی آنزیم استیل کولین استراز شده، بنابراین نمی توانند تأثیری در فعالیت آنزیم داشته باشند. بنابراین باید به کمک روش هایی همچون جهش زایی هدایت شده ی جایگاه و نیز بیان عملکردی معلوم شود که کدام جهش و یا