غلام خداکرمیان

باکتری های اندوفیت به باکتری هایی گفته می شود که در داخل گیاهان زندگی می کنند و علائم بیماری آشکاری را در میزبان ایجاد نمی کنند. هر گیاه می تواند میزبان یک و یا چندگونه باکتریایی باشد. تعدادی از این باکتری ها که به فراوانی از میزبان ها جدا می شوند و جمعیت غالبی دارند می توانند به عنوان باکتری های ساکن و اندوفیت برگ معرفی شوند. اخیراً، محققین تحقیقات خود را روی باکتری های اندوفیت به دلیل توانایی بالقوه این باکتری ها در بیوتکنولوژی، متمرکز کرده اند. در طول فصل زراعی سال 1393، از 12 منطقه مهم چغندرکاری غرب کشور بازدید شده و نمونه های اندام های هوایی تعداد 23 گیاه شاداب و قوی به طور تصادفی با حرکت در قطرهای مزرعه گردآوری شد. پس از انتقال نمونه ها به آزمایشگاه ، ابتدا برگ ها با اتانول 70 درصد ضدعفونی و سپس در محلول فسفات 10 درصد له شدند. پس از گذشت 30 تا 60 دقیقه قطراتی از سوسپانسیون نمونه ها در محیط کشت آگار مغذی دارای 3 گرم در لیتر عصاره مخمر کشت و در دمای 25 درجه سانتی گراد قرار داده شدند. پس از رشد کلنی های باکتریایی، برحسب شکل ظاهری و رنگ کلنی از هر نمونه در هر پتری دیش تعداد 2 تا 3 کلنی انتخاب و روی محیط کشت مزبور خالص شدند. درمجموع 85 استرین باکتریایی به این روش جداسازی شد. برای انتخاب نماینده استرین های باکتریایی ابتدا پروتئین های محلول سلولی استخراج و به روش ناپیوسته لاملی الکتروفورز شدند. درمجموع، 13 الکتروتیپ مختلف پروتئینی به این روش شناسایی شد. تعداد سه عدد از این الکتروتیپ ها (23 درصد کل الکتروتیپ ها) وقوع بالایی داشته و یک نماینده از هر الکتروتیپ انتخاب و با روش های استاندارد باکتری شناسی ویژگی های فنوتیپی آن ها تا حد شناسایی گونه بررسی شد. همچنین ژن های کد کننده 16srRNA نماینده-های هر یک از سه گروه با روش آزمون PCR با استفاده از آغازگرهای fD1و rD1 فراوان سازی و پس از توالی یابی، با بانک داده های موجود در سایت NCBI با نرم افزار بلاست آنالیز و مقایسه شدند و به عنوان گونه های Acinetobacter calcoaceticus، Pseudomoas aeruginosa و Stenotrophomonas maltophilia شناسایی شدند. سایر الکتروتیپ ها وقوع پایین تری داشته و ویژگی فنوتیپی آن ها تا سطح جنس با استفاده از روش های استاندارد باکتری شناسی بررسی شد و این الکتروتیپ ها به ترتیب به عنوان جنس های Streptomyces sp،sp A