ورمپستان یکی از بیماری های مهم گاوهای شیری است که خسارت های اقتصادی فراوانی را به صنعت دامداری تحمیل می کند. از آنجا که در میان باکتری های عامل ورمپستان، استافیلوکوکوس اورئوس، به عنوان یکی از مهم ترین و شایع ترین عوامل محسوب می شود، مطالعه حاضر با هدف، جداسازی این باکتری از نمونه های شیر گاوهای مبتلا به ورمپستان بالینی در گاوداری های صنعتی شهرستان همدان انجام شد. بدین منظور، تعداد 130 نمونه شیر از گاوهای مبتلا به ورم پستان بالینی طی فصول مختلف سال های 1395 و 1396 جمع آوری و تست ورم پستان کالیفرنیا (CMT) و شمارش سلول های سوماتیک (SCC) بر روی این نمونه ها انجام شد. سپس، استافیلوکوکوس اورئوس ها با کشت نمونه های شیر بر روی محیط آگار خون دار، جداسازی و با استفاده از آزمون ها و محیط های بیوشیمیایی مانند رنگ آمیزی گرم، تست کاتالاز، تست کواگولاز، DNase و مانیتول سالت آگار، مورد تشخیص قرار گرفتند. پس از آن هویت تمامی جدایه ها و مقاومت آنها به متی سیلین به صورت ژنوتیپی با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز چندگانه (Multiplex PCR) به ترتیب تایید و ارزیابی شد. در ادامه، مقاومت آنتی بیوتیکی جدایه ها به صورت فنوتیپی با روش انتشار دیسک نیز مورد بررسی قرار گرفت. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که 70 نمونه شیر (84/53%)، نمونه-های دارای امتیاز بالا در تست CMT و 52 نمونه (40%)، نمونه های دارای امتیاز بالا در شمارش سلول های سوماتیک بودند. میزان هم بستگی بین نتایج دو آزمون CMT و SCC با استفاده از ضریب همبستگی اسپیرمن، 64/0 تعیین گردید. همچنین از تعداد 130 نمونه شیر اخذ شده، 33 نمونه (39/25%) به باکتری استافیلوکوکوس اورئوس آلوده بودند. نتایج آزمون حساسیت آنتی-بیوتیکی این جدایه ها نشان داد که بیشترین مقاومت (42/42%)، نسبت به آنتی بیوتیک پنی سیلین وجود داشت. در حالی که آنتی بیوتیک های ونکومایسین و اگزاسیلین، موثرترین آنتی بیوتیک ها بر علیه جدایه ها بودند و تمامی جدایه ها (100%)، نسبت به این دو آنتی بیوتیک حساس بودند. با این وجود، نتایج آزمون PCR Multiplex نشان داد که 5 عدد (15/15%) از جدایه های استافیلوکوکوس اورئوس، واجد ژن mecA بودند و به عنوان استافیلوکوکوس اورئوس های مقاوم به متی سیلین (MRSA) شناسایی شدند. نتایج این مطالعه حاکی از شیوع بالای باکتری استافیلوکوکوس اورئوس به عنوان عامل مسبب